使用噬菌體展示鑒定免疫原性共生抗原

體液免疫在建立和維持宿主-微生物群共生以及對病原微生物的免疫力中起著重要作用。然而，鑒定在屏障和全身組織內(nèi)引發(fā)適應(yīng)性免疫反應(yīng)的抗原是進一步理解這種宿主-微生物對話的重大障礙。在這里，我們提供了一種方案，通過使用噬菌體（噬菌體）展示介導的抗體/抗原生物淘選來鑒定共生微生物和病原微生物表達的免疫原性蛋白抗原。該程序需要生成 M13 噬菌粒文庫，生產(chǎn) ORFeome（開放閱讀框總量）噬菌體文庫，然后進行多輪基于親和力的免疫沉淀，隨后通過 ELISA、ELISPOT 和/或 B 細胞四聚體生成進行抗原驗證。該方案經(jīng)過優(yōu)化，可識別引發(fā) IgA 和 IgG 同種型反應(yīng)的抗原，并可以使用循環(huán)抗體或腸道抗體進行抗原鑒定。編碼推定蛋白抗原的單克隆噬菌體的生成和分離能夠通過 Sanger 測序輕松鑒定免疫原性抗原，通常提供攜帶表位區(qū)域的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域級分辨率。我們的方案可以由訓練有素的分子生物學家執(zhí)行，并能夠在數(shù)周內(nèi)進行抗原鑒定和驗證。

原標題：Identification of immunogenic commensal antigens using phage display
源于Nature Protocols (2025) 通訊作者：Samantha Kimmel & Oliver J. Harrison

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